ATCC支原体检测 | 转染试剂ATCC产品订购指南
返回列表 回复 发帖

[交流] 普通PCR基因组出现非特异性扩增带解决对策

PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。
3.1  原因
一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。
二是Mg2+离子浓度过高、
退火温度过低,
及PCR循环次数过多有关。
其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,
酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
3.2  对策
①必要时重新设计引物。
②减低酶量或调换另一来源的酶。
③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次数。
④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸
返回列表
无上一主题
下一主题:实时荧光定量PCR专辑